青岛市冬春季儿童腹泻腺病毒感染分子流行病学特点
作者：苏冬梅 刘玉兰 艾福花 岳长青
【摘要】 目的 了解青岛市2007年冬春季儿童腹泻腺病毒（EADV）感染的流行病学特点。方法 收集2007年1～5月临床诊断为病毒性腹泻病儿的粪便标本，采用ELISA及PCR方法检测EADV。结果 106例标本检测阳性率为38%，随机抽取10例阳性标本进行DNA诊断，均为EADV。结论 青岛市冬春季儿童腹泻与EADV感染有关，流行株为40、41型的病毒株。
【关键词】 腺病毒科感染 腹泻 流行病学
［ABSTRACT］ Objective To investigate the epidemiological features of EADV infection in Qingdao in winter and spring in 2007. Methods Stool specimens from 106 children with diarrhea infected from February to May 2007 were collected for EADV detection by ELISA and PCR. Results Of 106 specimens examined, the positive rate being 38%. Ten positive specimens were taken randomly for DNA diagnosis, but cluster had not yet been confirmed. Conclusion EADV infection is related to children with diarrhea in winter and spring in Qingdao, the epidemic strains are cluster 40 and 41.
［KEY WORDS］ Adenoviridae infections; Diarrhea; Epidemiology
腹泻腺病毒（EADV）是引起成人和儿童非细菌性急性胃肠炎暴发和散发的重要病原体，它所致的腹泻在世界多个国家均有报道。近年来研究证明，EADV是引起我国许多地区儿童季节性、病毒性腹泻的重要的病原体[1]。本研究旨在进一步了解青岛市儿童冬春季腹泻病毒感染的流行病学特点。
1 对象与方法
1.1 对象
2007年1～5月，选择青岛市儿童医院、青岛大学医学院附属医院和青岛市市立医院临床诊断为病毒性腹泻的病儿106例，其中男57例，女49例，年龄为0～4岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 采集腹泻病儿粪便标本0.5 g加入生理盐水5 mL，并加入青霉素、链霉素（双抗）各500 U，振荡彻底混匀后，4 ℃ 4 000 r/min 离心30 min，取上清液放入离心管中，4 ℃ 10 000 r/min离心30 min,吸取上清液，-70 ℃保存备用。
1.2.2 EADV的ELISA检测 ELISA检测试剂盒购自美国BTB公司，严格按说明书操作。
1.2.3 EADV的PCR检测 采用腺病毒F组（Ad40和Ad41）PCR的一对寡核苷酸引物（由上海生工公司合成）：5′ACTTAATGCTGACACGGGCAC3′（上游），5′TAATGTTTGTGTTACTCCGCTC3′（下游）。PCR反应体积为50 μL，其中包含50 mmol/L KCl, 10 mmol/L TrisHCl，1 g/L Triton, 2 mmol/L MgCl2，200 mmol/L dNTP, 引物各0.8 μmol/L，1.5 U Taq DNA酶，5 μL DNA提取液。反应在PE 480扩增仪上进行，反应条件：94 ℃预变性3 min；然后94 ℃变性40 s，55 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，共35个循环；最后延伸10 min，扩增片段长519 bp。分子质量标准采用DL2000，经PCR扩增后，于12 g/L琼脂凝胶（含EB）上电泳，100 V，45 min。紫外线下观察结果。
2 结果
共检出EADV阳性标本39例，阳性率为38%(39/106)。用随机数字法抽取EADV阳性标本10例经PCR检测，均证实为EADV。
2.1 EADV腹泻病儿的性别、年龄分布
本文39例EADV阳性标本中，男23例，女16例，两者比较差异无显著性（P>0.05）；1岁者10例（26%），2岁者13例（33%），3岁者16例（41%），三者比较差异无显著性（P>0.05）。
2.2 EADV腹泻病儿的月分布
在2007年冬春季的5个月中，以5月份阳性率最高，为14%（15/106）， 其他依次为：4月份9%（10/106）， 3月份8%（8/106 ），2月份5%（5/106），1月份1%（1/106）。
3 讨论
EADV是世界范围急性非细菌性胃肠炎的重要病原，临床症状以腹泻、发热、呕吐等为主要表现。该病在冬春季流行。本调查结果显示，病儿腹泻粪便EADV阳性率为38%，表明EADV是重要的病原体[2]。
本研究结果显示，在5个月中以5月份阳性率最高（14%），2、3、4月份也均有较高的阳性率。当然，腹泻的地区、时间、人群等分布均有所差异［3］。本研究时间较短，要明确青岛市全年发病情况还需扩大时间范围及进行社区人群的研究。本研究中EADV感染病儿主要分布于2岁以下，占检测总数的22%（23/106），与我国其他地区研究结果相似。
国外有关研究资料表明，轮状病毒与EADV合并感染的情况很少见。但我国EADV感染情况是否如此则没有相关的研究结果。本研究随机抽取了10例EADV阳性标本进行DNA诊断，结果均为EADV。表明EADV是引起青岛市某些医院儿童冬春季腹泻的重要病原体，所造成的危害应当引起重视，应开展正规和广泛协作的流行病学研究，以全面、系统地了解我国人群中EADV感染情况的规律和特点，为控制EADV感染提供理论依据。
此外，本研究所用引物与腺病毒F组（Ad40和Ad41）六邻体基因高度保守区互补。扩增EADV基因相应片段，当双链DNA变性后再低温退火，病毒基因组双链DNA可形成单链环状DNA。研究证实，EADV感染病例中40、41型病毒株同为本研究季节性的流行株。
【参考文献】
[1]苏冬梅,岳长青,孟林,等. 免疫斑点法对病毒性腹泻病人腺病毒抗体的检测[J]. 青岛大学医学院学报, 2003,39(1)：5456.
[2]PRING A, KERBLOM P A, DRIAN T. Type 2 and group 2 specific polymerase chain reaction for adenovirus detection[J]. Res Virol, 1994,145：2535.
[3]戴迎春,聂军,刘翼,等. 广州地区人类杯状病毒感染的初步研究[J]. 第一军医大学学报, 2004,24：296299.
