上皮性卵巢癌中FLIP，FADD 表达情况与临床分期和病例分级之间的关系初步研究
【摘要】目的 对上皮性卵巢癌中FLIP，FADD表达情况与临床分析和病例分级之间的关系进行初步研究。方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（S-P 法）及逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR 法）检测上皮性卵巢癌中 FLIP，FADD 的表达情况，并通过免疫组化法（S-P 法）检测上皮性卵巢癌中 PCNA 的表达情况，来评价上皮性卵巢癌细胞的增殖情况。结果 按临床分期，上皮性卵巢癌中I-II期FLIP阳性表达率为30.00%（3/10），III-IV期FLIP阳性表达率79.41%（27/34）；上皮性卵巢癌中III期FADD阳性表达率为 100%（10/10），III-IV期FADD阳性表达率 67.65%（23/34）。按病理分级，上皮性卵巢癌中1级FLIP阳性表达率为 47.62%（10/21），2-3级FLIP阳性表达率 86.96%（20/23）；上皮性卵巢癌中1级FADD阳性表达率为 71.43%（15/21），2-3级FADD阳性表达率 39.13%（9/23）。结论 FLIP，FADD，PCNA 表达高低与上皮性卵巢癌组织病理分级，临床分期有关，并且 FLIP，FADD表达均与PCNA表达有相关关系；提示 FLIP，FADD 表达情况可反映上皮性卵巢癌细胞分化状态及恶性程度。
【关键词】F L I P ；F A D D ；上皮性卵巢癌；凋亡
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病之一，且近十年来我国上皮性卵巢癌发病率有上升趋势[1]。由于卵巢特殊的解剖和组织结构特点及其深居盆腔内部的特性，就诊时多数已属晚期，多有广泛转移，5年生存率徘徊于30%。与其他恶性肿瘤一样，上皮性卵巢癌的发生、发展也是一个多步骤、多阶段且有序的过程。目前已经认识到原癌基因的激活，抑癌基因的失活是细胞癌变的基础，多种原癌基因和抑癌基因的表达失常或失衡，导致细胞无控增殖，在肿瘤发生、发展和转归上起关键作用[2]。
1 研究对象
1.1 病例来源
选取湖南省长沙市一医院和中南大学湘雅二医院妇产科2004年12月～2007年2月期间初次住院治疗的上皮性卵巢癌病例，临床及病理资料完整，手术切除组织蜡块可得并经病理确诊者纳入实验，共44例。所有患者均行首次手术治疗，术前均未接受过化疗或放疗。经手术病理确诊，其中浆液性囊腺癌22例，粘液性囊腺癌19例，子宫内膜样癌2例，透明细胞癌1例。患者年龄36～72岁，平均年龄60岁；组织病理分级按WHO分级标准：1级21例，2-3级23例。临床分期按FIGO(2000年)分期标准：I-II期10例，III-IV期34例。
同时选取同期收治并手术的良性卵巢上皮性肿瘤25例，正常卵巢组织25例作为对照组。其中正常卵巢病例，来自因子宫肌瘤行全子宫+双附件切除的患者。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片（厚4μm）。切片均做HE染色，便于与免疫组化染色对照。
1.2 标本采集
每一例标本均在手术切除后立即采集，同时取两块，一块经生理盐水冲洗后立即放入液氮罐中，并尽快转移到-80℃冰箱中保存。另一块用10%甲醛溶液固定后，常规脱水石蜡包埋保存备用。
1.3 方法
采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（SP法）及逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR法）检测上皮性卵巢癌中FLIP，FADD的表达情况，并通过免疫组化法（S-P法）检测上皮性卵巢癌中PCNA的表达情况，来评价上皮性卵巢癌细胞的增殖情况。
1.4 统计学方法
采用统计学分析软件SPSS13.0版。以a=0.05为显著性检验水准，P＜0.05时认为有统计学意义。统计学方法：用Pearson X2检验分析FLIP和FADD在上皮性卵巢癌、良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的阳性表达是否有差别；用Pearson X2检验分析FLIP和FADD表达与上皮性卵巢癌临床分期、病理组织学分级、病理类型等的关系；用Spearman等级相关系数分析上皮性卵巢癌中FLIP、 FADD与PCNA表达的相关性。半定量RTPCR积分吸光度比值比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q法。计量资料结果以(x ±s)表示。
2 结果
44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中 FLIP，FADD阳性表达率与临床分期的关系分别见表1。44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中FLIP，FADD阳性表达率与病理分级的关系分别见表2。
3 讨论
凋亡又称细胞程序性死亡，是一种不同于细胞坏死的生理性死亡方式。其形态和生化方面的变化主要包括细胞皱缩、膜结构消失、染色体浓缩、DNA短裂、凋亡小体形成等[3]。几乎所有的低等和高等动物的细胞均具有细胞凋亡这一功能，细胞凋亡对多细胞动物机体的正常发育和自身稳定起着重要作用。正常组织中的细胞增殖与细胞凋亡之间处于动态平衡状态；而在癌前病变或癌组织中肿瘤细胞的增殖与凋亡关系失调[4]。表现为：1、细胞增殖能力加强，细胞凋亡受到抑制。2、细胞增殖无明显增强，细胞凋亡明显受到抑制。3、细胞凋亡与增殖均增强，但增殖超过凋亡，细胞不断增多。可见任何影响凋亡的改变，在肿瘤发生发展及治疗上的意义。
学者们普遍认为PCNA与肿瘤的组织病理分级，临床分期，浸润程度及预后密切相关，通过对细胞PCNA表达情况进行检测可以了解肿瘤组织的增殖活性[5]。本研究通过免疫组化半定量法检测上皮性卵巢癌组织中FLIP、FADD的表达水平，并用PCNA检测上皮性卵巢癌细胞增殖情况发现：FLIP、FADD的表达均与上皮性卵巢癌患者性别、年龄、淋巴结转移无关；与上皮性卵巢癌组织病理分级、临床分期有关。FLIP，PCNA的表达随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期的增高而增高；FADD的表达则随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期增高而降低。F L I P 的表达与PCNA的表达正相关；FADD的表达与PCNA的表达负相关。
研究结果可提示：FLIP可能通过抑制癌细胞凋亡，参与上皮性卵巢癌的发生发展过程。它的抗凋亡作用，并伴随肿瘤细胞增殖能力的增强，可能在上皮性卵巢癌的恶性进展中起一定作用。随着肿瘤细胞的增殖能力增强，FADD的表达下降，由其决定的细胞凋亡通路，可能发生部分阻断，从而促进了肿瘤的恶变。FLIP、FADD的表达变化与上皮性卵巢癌恶性程度关系密切，这对上皮性卵巢癌基因治疗中靶基因的选择，有一定的指导意义。
参考文献
[1] 乐杰主编. 妇产科学（第6 版）. 北京：人民卫生出版社,2005,241～243.
[2] 高思海,潘铁成,赵金平,李军.食管鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关[J].世界华人消化杂志，2004;12(4)：1470-1473.
[3] Chinnaiyan AM,Rourke K,et al.FADD,a novel deathdomain-containing protein,interacts with the deathdomain of Fas initiates apoptosis[J].J Cell,1995;81(19):505-510.
[4] Kidd VJ.Proteolytic activites tat mediate apoptosis[J].Annu Rev Physiol,1998;60:533.
[5] 顾炜,彭志海,裘国强,等.肝癌组织中凋亡信号蛋白的表达及其临床意义[J].中国肿瘤,2003;12(1):48-50.
【关键词】F L I P ；F A D D ；上皮性卵巢癌；凋亡
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病之一，且近十年来我国上皮性卵巢癌发病率有上升趋势[1]。由于卵巢特殊的解剖和组织结构特点及其深居盆腔内部的特性，就诊时多数已属晚期，多有广泛转移，5年生存率徘徊于30%。与其他恶性肿瘤一样，上皮性卵巢癌的发生、发展也是一个多步骤、多阶段且有序的过程。目前已经认识到原癌基因的激活，抑癌基因的失活是细胞癌变的基础，多种原癌基因和抑癌基因的表达失常或失衡，导致细胞无控增殖，在肿瘤发生、发展和转归上起关键作用[2]。
1 研究对象
1.1 病例来源
选取湖南省长沙市一医院和中南大学湘雅二医院妇产科2004年12月～2007年2月期间初次住院治疗的上皮性卵巢癌病例，临床及病理资料完整，手术切除组织蜡块可得并经病理确诊者纳入实验，共44例。所有患者均行首次手术治疗，术前均未接受过化疗或放疗。经手术病理确诊，其中浆液性囊腺癌22例，粘液性囊腺癌19例，子宫内膜样癌2例，透明细胞癌1例。患者年龄36～72岁，平均年龄60岁；组织病理分级按WHO分级标准：1级21例，2-3级23例。临床分期按FIGO(2000年)分期标准：I-II期10例，III-IV期34例。
同时选取同期收治并手术的良性卵巢上皮性肿瘤25例，正常卵巢组织25例作为对照组。其中正常卵巢病例，来自因子宫肌瘤行全子宫+双附件切除的患者。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片（厚4μm）。切片均做HE染色，便于与免疫组化染色对照。
1.2 标本采集
每一例标本均在手术切除后立即采集，同时取两块，一块经生理盐水冲洗后立即放入液氮罐中，并尽快转移到-80℃冰箱中保存。另一块用10%甲醛溶液固定后，常规脱水石蜡包埋保存备用。
1.3 方法
采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（SP法）及逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR法）检测上皮性卵巢癌中FLIP，FADD的表达情况，并通过免疫组化法（S-P法）检测上皮性卵巢癌中PCNA的表达情况，来评价上皮性卵巢癌细胞的增殖情况。
1.4 统计学方法
采用统计学分析软件SPSS13.0版。以a=0.05为显著性检验水准，P＜0.05时认为有统计学意义。统计学方法：用Pearson X2检验分析FLIP和FADD在上皮性卵巢癌、良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的阳性表达是否有差别；用Pearson X2检验分析FLIP和FADD表达与上皮性卵巢癌临床分期、病理组织学分级、病理类型等的关系；用Spearman等级相关系数分析上皮性卵巢癌中FLIP、 FADD与PCNA表达的相关性。半定量RTPCR积分吸光度比值比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q法。计量资料结果以(x ±s)表示。
2 结果
44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中 FLIP，FADD阳性表达率与临床分期的关系分别见表1。44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中FLIP，FADD阳性表达率与病理分级的关系分别见表2。
3 讨论
凋亡又称细胞程序性死亡，是一种不同于细胞坏死的生理性死亡方式。其形态和生化方面的变化主要包括细胞皱缩、膜结构消失、染色体浓缩、DNA短裂、凋亡小体形成等[3]。几乎所有的低等和高等动物的细胞均具有细胞凋亡这一功能，细胞凋亡对多细胞动物机体的正常发育和自身稳定起着重要作用。正常组织中的细胞增殖与细胞凋亡之间处于动态平衡状态；而在癌前病变或癌组织中肿瘤细胞的增殖与凋亡关系失调[4]。表现为：1、细胞增殖能力加强，细胞凋亡受到抑制。2、细胞增殖无明显增强，细胞凋亡明显受到抑制。3、细胞凋亡与增殖均增强，但增殖超过凋亡，细胞不断增多。可见任何影响凋亡的改变，在肿瘤发生发展及治疗上的意义。
学者们普遍认为PCNA与肿瘤的组织病理分级，临床分期，浸润程度及预后密切相关，通过对细胞PCNA表达情况进行检测可以了解肿瘤组织的增殖活性[5]。本研究通过免疫组化半定量法检测上皮性卵巢癌组织中FLIP、FADD的表达水平，并用PCNA检测上皮性卵巢癌细胞增殖情况发现：FLIP、FADD的表达均与上皮性卵巢癌患者性别、年龄、淋巴结转移无关；与上皮性卵巢癌组织病理分级、临床分期有关。FLIP，PCNA的表达随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期的增高而增高；FADD的表达则随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期增高而降低。F L I P 的表达与PCNA的表达正相关；FADD的表达与PCNA的表达负相关。
研究结果可提示：FLIP可能通过抑制癌细胞凋亡，参与上皮性卵巢癌的发生发展过程。它的抗凋亡作用，并伴随肿瘤细胞增殖能力的增强，可能在上皮性卵巢癌的恶性进展中起一定作用。随着肿瘤细胞的增殖能力增强，FADD的表达下降，由其决定的细胞凋亡通路，可能发生部分阻断，从而促进了肿瘤的恶变。FLIP、FADD的表达变化与上皮性卵巢癌恶性程度关系密切，这对上皮性卵巢癌基因治疗中靶基因的选择，有一定的指导意义。
参考文献
[1] 乐杰主编. 妇产科学（第6 版）. 北京：人民卫生出版社,2005,241～243.
[2] 高思海,潘铁成,赵金平,李军.食管鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关[J].世界华人消化杂志，2004;12(4)：1470-1473.
[3] Chinnaiyan AM,Rourke K,et al.FADD,a novel deathdomain-containing protein,interacts with the deathdomain of Fas initiates apoptosis[J].J Cell,1995;81(19):505-510.
[4] Kidd VJ.Proteolytic activites tat mediate apoptosis[J].Annu Rev Physiol,1998;60:533.
[5] 顾炜,彭志海,裘国强,等.肝癌组织中凋亡信号蛋白的表达及其临床意义[J].中国肿瘤,2003;12(1):48-50.
